酵素標識プローブによるシングルコピー遺伝子の検出

安積　大治、原田　竹雄、佐藤　毅、松川　勲

北海道立農試集報．61，61-67 (1990)

　酵素の化学反応を標識として利用した、サザンハイプリダイゼーションによるシングルコピー遺伝子の検出について検討した。 　材料としてトマト上位葉から抽出した全DNAを用いた。DNAを制限酵素で分解した後に電気泳動し、ナイロンメンブレンにトランスファーした。 　プローブとしてトマト核DNAのリブロース-1、6-2リン酸カルボキシラーゼ（Rubisco）の小サブユニット3Aのクローンを用い、プローブDNAの標識は、ECL遺伝子検出システム（アマシャムジャパン社）法によった。 　サザンハイブリダイゼーションの結果、シングルコピー遺伝子であるRubisco小サブユニット3Aが検出された。 　トマトのゲノムサイズから概算すると検出感度は約5pgであった。 　また、プローブとしてDNAだけでなくRNAも利用できることが示唆された。

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