成績概要書（作成　平成11年1月）

1.　目　的

　ダイズわい化病抵抗性に関するDNAマーカーを開発することにより、大豆のDNAマーカー選抜法の確立を目指す。

2.　方　法

供試材料：わい化病抵抗性の異なる両親間の分離集団2組合せ、「中交0505（「ツルコガネ（強）」×「トヨムスメ（弱）」）」および「中交0506（「ツルコガネ（強）」×「トヨコマチ（弱）」）」。

わい化病抵抗性検定：伊達市に設置した現地選抜圃場に個体または系統で栽植し、自然感染による発病度等を調査した。

DNAマーカーの探索：F₂集団、2組合せを対象にRAPD分析を行い､F₃系統で実施した抵抗性検定結果から、抵抗性に有意なマーカーを選抜した。

DNAマーカーの評価：F₅種子、1組合せ（中交0505）351粒を播種前にRAPDマーカーにより遺伝子型を検定し、その後伊達市の現地選抜圃場に播種して評価した。

連鎖地図の作成とインターバルマッピング：F₆系統、1組合せ（中交0505）を対象にRFLP解析を行い、連鎖分析にはMAPMAKER/EXP3.0を、インターバルマッピングにはMap Manager QTb24を使用した。また、RFLP解析用に生物研よりPublic Soybean Probesの提供を受け、連鎖地図の作成には千葉大学の協力を得た。

3.　結果の概要

1)　検定の結果、わい化病の発病度は量的形質（QTL）であることが示唆された。また、RAPD分析より連鎖群G2の3つのマーカーが、わい化病の発病度について有意となり、この領域に発病度に関するQTLが存在するものと思われた。

2)　得られたRAPDマーカーにより、播種前にF₅種子の遺伝子型決定を行った。その結果、OPJ06について「ツルコガネ」型は「トヨムスメ」型に対して発病程度がやや低い傾向にあったが、このマーカーによる抵抗性の選抜は困難と判断された。

3)　以上の結果から、G2領域に関する連鎖地図を作製し、インターバルマッピングを行うこととした。千葉大学の協力により、G2領域はUSDAの連鎖群Gに相当することが明らかとなった。

4)　F₆系統について、連鎖群Gに関するプローブを用いたRFLP解析の結果、全長72.6cMに10個のマーカーが座乗する地図が作製できた。わい化病の発病度に関するインターバルマッピングを試みたところ、RFLPマーカーA073の付近に小さなQTLが1つ、A112の上方にさらに大きなQTLの存在が示唆された。この2つのマーカーを組み合わせてF₆系統を群別した結果、発病度の分離はやや大きくなったが、連鎖群GのA112より上方の解析が進み、より効果の大きなマーカーが得られれば、発病度の分離が明瞭となることが期待される。

　　図１.　F₃世代の発病度

　表1.　わい化病発病度の有意差検定（t値）

マーカー	中交0505	中交0506
OPD10 OPE01 OPJ06	3.168** 2.600* 3.168**	3.799** 3.864** 1.906

　注）マーカーの有無により群別し、平均値の差を検定した。
RAPDマーカーは完全優性のため、ヘテロが区別できない。

　　図２.　F₅世代の発病度

　　図３.　F₆世代の発病度

　　図４　インターバルマッピング

4.　成果の活用面と留意点

5.　残された問題点とその対応