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1.課題の分類 総合農業 作物生産 夏作物−センキュウダイオウ 増殖 北海道 畑作 特作 園芸 2.研究課題名 道産生薬の品質向上と栽培・育成に関する研究 Ⅰ.センキュウとダイオウの組織培養に関する試験 3.予算区分 共 同 4.研究期間 (昭和60〜62年) 5.担 当 中央農試園芸部 野菜花き第1科 6.協力・分担関係 |
7.目 的
センキュウとダイオウの組織培養による増殖法を明らかにする。
8.試験研究方法
(1)センキュウ ①培養部位、根茎頂芽 ②材料摘出の大きさ 約0.5㎜
(2)ダイオウ ①供試材料、ダイオウA(中国原産の実生）、ダイオウB(信州大黄)
②培養部位、根茎側芽 ③材料摘出の大きさ 約0.5mm
(3)各試験に共通する培養方法
①培地条件Marashige&skoog(MS)培地 シュークロース3% PH5.5
寒天0.7%に所定の生長調節物質を加えた。
②培養条件、温度20℃±1℃ 照度2,000〜3,000Lux 16時間照明
9.結果の概要・要約
(1)センキュウ
①MS培地、NAA0.5㎎/L BA0.02㎎/Lで0.2〜1.0㎜の茎頂組織から、幼植物が得られた。
②GA31.0㎎/Lを添加すると、生育促進効果が認められた。
③カルス誘導培地としては、MS培地、NAA3.0㎎/L、BA0.3㎎/Lで効率が良かった。
④カルスからの不定芽誘導培地としては、MS培地BA0.01㎎/Lで多数のシュートが得られた。
⑤シュートを、ホルモン無添加培地に移植すると発根した。
(2)ダイオウ
①カルス形成はダイオウA、及ぴダイオウB共にNAA濃度が高いほど良好であった。
②不定芽の形成は、BA濃度が高く、NAA濃度が低い方が良好な傾向であった。
③ダイオウBは、NAA-BA(0.1-3.0㎎/L)で葉条塊が得られた。
④ダイオウAは、継代培養をすることによってNAA-BA(0.1-3.0㎎/L)で葉の表皮の葉脈から不定芽が形成された。
⑤また、同様の培地で葉を葉柄から切り取り、培養しても不定芽が形成された。
⑥シュートの発根培地としては、MS培地の無機塩濃度を1/2に希釈し、NAAを1.0㎎/L添加した培地が適当であった。
10.成果の具体的数字
表-1 組織片の大きさと培養結果(60.9.5〜10.30)
| 個体 番号 |
置床時の茎頂 組織片の大きさ |
10月23日 | 10月30日 | ||||
| 草丈 | 発根 | カルス | 草丈 | 発根 | カルス | ||
| 1 | 1.0mm | 10mm | − | ＋ | 10mm | − | ＋ |
| 2 | 1.0 | 5 | − | ＋ | 5 | − | ＋ |
| 3 | 1.0 | 13 | − | ± | 15 | − | ± |
| 4 | 0.5 | 1 | − | ± | 1 | − | ± |
| 5 | 0.5 | 3 | ＋ | ± | 10 | ＋ | ± |
| 6 | 0.3 | 2 | − | ± | 2 | − | ＋ |
| 7 | 0.2 | 枯死 | |||||
| 8 | 0.2 | 0.5 | − | − | 1 | − | ＋ |
表-2 GA3濃度と培養結果(60.9.7〜12.14)
| GA3 | 置床数 | 雑菌汚染 | 枯死 | カルス化 | 茎葉分化 | 根分化 |
| 0mg/L | 9個 | 0個 | 2個 | 1個 | 5個 | 5個 |
| 0.1 | 8 | 3 | 0 | 1 | 4 | 2 |
| 1.0 | 8 | 2 | 1 | 1 | 4 | 4 |
表-3 GA3濃度と鉢上げ時の生育状況(12月14日調査)
| GA3 | 草丈 | 葉数 | 根数 | 根長 |
| 0mg/L | 22mm | 3.2枚 | 3.0本 | 16mm |
| 0.1 | 18 | 2.8 | 3.5 | 13 |
| 1.0 | 31 | 3.5 | 4.8 | 23 |
表-4 カルス形成に及ぼすNAA・BA濃度の影響
A カルス形成
| NAA(mg/L) | |||||
| 0.1 | 0.3 | 1.0 | 3.0 | ||
| BA (mg/L) |
0.1 | − | − | ＋ | ＋ |
| 0.3 | − | − | − | ＋＋＋ | |
| 1.0 | − | − | ＋ | ＋＋ | |
| 3.0 | − | ＋ | ＋ | ＋＋ | |
B シュートの生長
| NAA(mg/L) | |||||
| 0.1 | 0.3 | 1.0 | 3.0 | ||
| BA (mg/L) |
0.1 | ＋＋ | ＋＋ | ＋＋＊ | ＋＋ |
| 0.3 | ＋＊ | ＋ | ＋＋ | − | |
| 1.0 | − | ＋ | − | − | |
| 3.0 | − | − | − | − | |
表-5 不定芽形成に及ぼすBA濃度の影響
| BA | 置床数 | カルスの 増殖良好 |
茎葉分化 | |
| 正常 | へら状 | |||
| 0mg/L | 12個 | 8個 | 4個(1) | 4個(2.5) |
| 0.01 | 12 | 9 | 1(1) | 6(3) |
| 0.1 | 12 | 7 | 0 | 3(2) |
| 1.0 | 6 | 5 | 1(1) | 4(2) |
表-6 ダイオウAのカルス形成に及ぼ
すNAA、BA濃度の影響
(調査12月24日)
| NAA conc(mg/L) |
|||||
| 0.1 | 0.3 | 1.0 | 3.0 | ||
| BA conc (mg/L) |
0.1 | NT | ＋ | ＋ | ＋＋ |
| 0.3 | ＋ | ＋ | ＋＋ | ＋＋＋ | |
| 1.0 | ＋＋ | ＋ | ＋〜＋＋ | ＋〜＋＋ | |
| 3.0 | ＋＋ | ＋＋ | ＋＋〜＋＋＋ | ＋＋ | |
表-7 ダイオウAの不定芽形成に及ぼす
NAA、BA濃度の形成
| NAA conc(mg/L) |
|||||
| 0.1 | 0.3 | 1.0 | 3.0 | ||
| BA conc (mg/L) |
0.1 | NT | − | − | − |
| 0.3 | − | − | − | − | |
| 1.0 | − | ＋ | ＋ | ＋ | |
| 3.0 | ＋ | ＋ | ＋ | − | |
表-8 ダイオウBのカルス形成に及ぼす
NAA、BA濃度の影響
(調査12月24日)
| NAA conc(mg/L) |
|||||
| 0.1 | 0.3 | 1.0 | 3.0 | ||
| BA conc (mg/L) |
0.1 | ＋ | ＋ | ＋＋ | ＋＋ |
| 0.3 | ＋ | ＋ | ＋＋ | ＋＋ | |
| 1.0 | ＋ | ＋ | ＋＋ | ＋＋ | |
| 3.0 | ＋＋＋ | c | ＋ | c | |
表-9 ダイオウBの不定芽形成に及ぼす
NAA、BA濃度の影響
| NAA conc(mg/L) |
|||||
| 0.1 | 0.3 | 1.0 | 3.0 | ||
| BA conc (mg/L) |
0.1 | − | − | − | − |
| 0.3 | − | − | − | − | |
| 1.0 | ＋ | ＋ | − | − | |
| 3.0 | ＋＋＋ | c | − | c | |
表-10 ダイオウAの発根に及ぼす無機塩濃度の影響(61.8.2〜9.16)
| 培地の 無機塩濃度 |
NAA濃度 (mg/L) |
移植 シュート数 (本) |
発根 シュート数 (本) |
同左率 (%) |
鉢上げ 可能個体 (個) |
| 1/2MS | 0 | 12 | 0 | 0 | 0 |
| 0.1 | 12 | 3 | 25 | 2 | |
| 1.0 | 12 | 10 | 83 | 9 | |
| MS | 0 | 12 | 0 | 0 | 0 |
| 0.1 | 12 | 0 | 0 | 0 | |
| 1.0 | 12 | 8 | 67 | 6 |
表-11 ダイオウAの発根に及ぼすオーキシンの影響(1/2MS)
(61.7.25〜8.25)
| オーキシン濃度 (mg/L) |
移植 シュート数 (本) |
発根 シュート数 (本) |
同左率 (%) |
鉢上げ 可能個体 (個) |
|
| IBA | NAA | ||||
| 0 | 0 | 12 | 0 | 0 | 0 |
| 0.1 | 0 | 12 | 0 | 0 | 0 |
| 1.0 | 0 | 12 | 4 | 33 | 3 |
| 0 | 0.1 | 8 | 0 | 0 | 0 |
| 0 | 1.0 | 16 | 11 | 69 | 6 |
11.成果の活用面と留意点
(1)ダイオウ・センキュウの増殖方法の基礎資料とする。
12.残された間題とその対応
培養株の特性検討(北見農試、衛生研にて継続検討)