【指導参考事項】

１９９５２５８

成績概要書　　　　（作成平成８年１月）

１．目的

　子牛の下痢症の主要な病原体であるロタウイルスの疫学的な解析を行うとともに、その診断法、免疫学的予防法を検討し、子牛の下痢症による損耗の低下を目指す。

２．方法

　（１）牛Ｃ群ロタウイルスの疫学的解析
　　１）牛Ｃ群ロタウイルスの分離と培養法の確立
　　２）ＥＬＩＳＡによるＣ群ロタウイルス診断法の開発と抗体調査

　（２）牛Ａ群ロタウイルスに起因する子牛下痢症の免疫学的予防法の検討
　　１）筋肉内および乳房内免疫によるＡ群ロタウイルスの母子免疫効果の検討
　　２）不活化Ａ群ロタウイルス投与時のアジュバント効果の検討
　　３）子牛下痢症混合ワクチン投与による下痢予防効果の検討

３．結果の概要

（１）−１）十勝管内の成牛下痢便より牛で初めてＣ群ロタウイルスを分離し、Shintoku株と命名した。また、アカゲザル腎臓由来ＭＡ１０４細胞を用いた培養法を確立した。

（１）−２）ロタウイルス感染症の簡易診断法として、豚Ｃ群ロタウイルスに対する高度免疫血清を用い、牛、豚、人のＣ群ロタウイルスが検出可能なサンドイッチＥＬＩＳＡを開発した。また、このウイルス検出用ＥＬＩＳＡのブロッキング反応を利用して、特異性の高い抗体検出用ＥＬＩＳＡを開発した。この抗体検出用ＥＬＩＳＡを利用して、道内におけるＣ群ロタウイルス感染症の血清疫学的調査を実施した結果、牛の５６．０％、豚の９２．５％が抗体陽性であり、牛および豚Ｃ群ロタウイルスが広く浸潤していることが示唆された。

（２）−１）分娩前の成牛に対するＡ群ロタウイルスの筋肉内および乳房内接種により、血清中および乳汁中のウイルス中和抗体価を上昇させ、子牛の下痢発症率を低下させることができた。

（２）−２）野外応用が可能性なオイルアジュバント（ＭＢＬ社）および水溶性樹脂アジュバント（カーボポール）の利用により、Ａ群ロタウイルスに対する免疫応答を高めることができた。

（２）−３）分娩前の成牛に対する子牛下痢症混合ワクチン（ラクトバック、ドイツ）の接種により、初乳中のＡ群ロタウイルスに対する中和抗体価は上昇したが、子牛下痢症の予防効果は明らかにできなかった。

表2.　筋肉内および乳房内免疫後の母牛の牛Ａ群ロタウイルス中和抗体価と子牛の下痢発生状況

		免疫群（9頭）	対照群（10頭）
母牛分娩時抗体価
血清	Lincoln	32,359a	490b
	ＫＫ3	17,378a	832b
初乳	Lincoln	309,030a	3,388b
	ＫＫ3	229,086a	7,585b
下痢発生頭数		5（55.6%）	1O（100%）
下痢持続日数		2.2	3.1
Ａ群ロタウイルス 陽性頭数		0（0%）	5（50%）

a,b:異文字間に有意差あり

表3.　子牛下痢症混合ワクチン接種後の母牛の牛Ａ群ロタウイルス中和抗体価と子牛の下痢発生状況

	ワクチン群 （51頭）	対照群 （46頭）
母牛分娩時抗体価
血清	640	160
初乳	5,881a	1114b
下痢発症頭数	29（56.9%）	23（50.0%）
下痢初発日齢	19.2	14.4
下痢持続日数	2.7	2.9
Ａ群ロタウイルス 陽性頭数	4（7.8%）	8（17.4%）
Ｋ99大腸菌 陽性頭数	O（0%）	0（O%）
サルモネラ菌 陽性頭数	0（O%）	O（O%）

a,b:異文字間に有意差あり

４．成果の活用面と留意点

（１）開発したＣ群ロタウイルス検出用ＥＬＩＳＡおよび抗体検出用ＥＬＩＳＡは特異性が高く、多検体処理に適していることから簡易診断法として活用できる。なお、ウイルス検出用ＥＬＩＳＡの検出感度は電子顕微鏡法と同程度である。

（２）試験２−（１）で試作したＡ群ロタウイルス生ワクチンの野外における実用化は困難であ乱また子牛下痢症混合ワクチンは現在日本には輪入されていない。

５．残された問題とその対応

　（１）牛Ｃ群ロタウイルスの病原性解明と広範な疫学調査による感染実態の解明
　（２）牛Ａ群ロタウイルスに対する効果的なワクチンの開発と免疫方法の検討