ジャガイモYウイルスえそ系統に対するモノクローナル抗体作製とELISAによる検出

堀田　治邦，佐々木　純，竹内　 徹

道総研農試集報．98，65-75 (2014)

　ジャガイモYウイルスえそ系統（PVY-N）の外被タンパク質（CP）を大腸菌で発現させ，これに対するモノクローナル抗体 (MAb) を作製し，ELISA法への適用を検討した。RT-PCRによって増幅させたCP遺伝子をpMAL-c2X発現ベクターにクローニングし，大腸菌に形質転換後，タンパク質を発現させてPVY-NのCPを得た。これをマウスに免疫し，PVY-Nタバコ罹病葉（以下，罹病葉）を用いて血清の抗体価を測定後，マウスを選定し，ハイブリドーマを作製した。限界希釈して得たクローンについて罹病葉を抗原としたスクリーニングを行い，PVY-Nに広く反応するMAbを得た。MAb D5を用いて直接吸着法（PTA-ELISA），ELISA法の二重抗体サンドイッチ法（DAS-ELISA），三重抗体サンドイッチ法（TAS-ELISA）に用いたところ，いずれのELISAにも適用でき，DAS-ELISAおよびTAS-ELISAでは罹病葉の104希釈，PTA-ELISAでは105希釈まで反応が認められた。また，MAb D5は抗原吸着を37℃で1時間，標識抗体を37℃で1時間反応させる直接法PTA-ELISAにも適用でき，その感度は罹病葉の104希釈までであった。MAb D5株はすべてのPVY-Nウイルス株を検出したが，一部のPVY-Oウイルス株にも反応した。

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